अनुसन्धान र तिनीहरूको प्रयोगको आणविक जैविक विधि

आणविक जीवविज्ञान अनुसन्धान विधि आधुनिक चिकित्सा, आपराधिक र जीव विज्ञान मा एक महत्वपूर्ण भूमिका निभािन्छ। डीएनए र आरएनए अध्ययनको क्षेत्रमा प्रगतिको लागि धन्यवाद, एक व्यक्तिले जीवको जीनोम अध्ययन गर्न, रोगको कारणपूर्ण एजेन्ट पहिचान गर्न सक्षम हुन्छ, एसिडको मिश्रणमा इच्छित न्यूक्लिक एसिडलाई चिन्न सक्छ।

अनुसन्धानको आणविक-जैविक विधि। यो के हो?

70 र 80 को पछि, वैज्ञानिकहरूले पहिलो जीनोमलाई पहिलो पटक मान्न सक्षम थिए । यस घटनाले आनुवंशिक ईन्जिनियरिङ् र आणविक जीवविज्ञानको विकास गर्न उत्प्रेरित गर्यो। डीएनए र आरएनए को गुणहरु को अध्ययन यो तथ्य को कारण भएको छ कि अब यो यो न्यूक्लिक एसिड को प्रयोग गर्न को लागी रोग को निदान गर्न को लागी जीन को अध्ययन गर्न सम्भव छ।

डीएनए र आरएनए को तैयारी

निदान को आणविक जैविक विधि प्रारंभिक सामाग्री को उपस्थिति को आवश्यकता छ: अधिक पल्ट उनि न्यूक्लिक एसिड हो। जीवित जीविका को कोशिकाहरु बाट यी पदार्थहरू अलग गर्न धेरै तरिकाहरू छन्। प्रत्येक मध्ये यसको फायदे र हानि छ, र शुद्ध रूप मा न्यूक्लिक एसिड को अलगाव को तरीका को चयन गर्दा यसलाई ध्यान मा राख्नु पर्छ।

1. मर्मर अनुसार डीएनए को तैयारी। विधिले शराब संग पदार्थको मिश्रणको उपचार गर्दैछ, जसको परिणामस्वरूप शुद्ध डीएनएले घटाउँछ। यस विधिको हानिकारक आक्रामक पदार्थहरूको प्रयोग हो: फिनेल र क्लोरोफेरो।

2. बूम अनुसार डीएनए अलगाव। यहाँ प्रयोग गरिएको मूल पदार्थ guanidine thiocyanate (GuSCN) हो। यसले विशेष सब्सट्रेटहरुमा deoxyribonucleic एसिड को वर्षा को बढावा गर्दछ, जसबाट देखि पछि यो विशेष बफर संग एकत्रित गर्न सकिन्छ। तथापि, GuSCN PTC को एक अवरोधक हो, र यसको एक सानो भाग पनि पूर्वनिर्मित डीएनए मा फंसएको छ, यसले बहुलकरेज श्रृंखला प्रतिक्रिया को कोर्स को प्रभावित गर्दछ, जो न्यूक्लिक एसिड संग काम मा एक महत्वपूर्ण भूमिका निभािन्छ।

3. दोषहरूको वर्षा। विधि अघिल्लो देखि भिन्न छ कि डाइओक्स्रिबोन्युक्लिक एसिडको अणुहरू स्पष्ट हुनु, तर अशुद्धता। यो गर्नका लागि, आयन एक्सचेन्जर्सहरू प्रयोग गर्नुहोस्। हानिकारक हो कि सबै पदार्थहरू व्यवस्थित हुन सक्दैनन्।

4. ठूलो स्क्रीनिंग। यो विधि यी अवस्थाहरूमा प्रयोग गरिन्छ जब डीएनए अणुको संरचनामा सटीक जानकारी आवश्यक छैन, तर केही सांख्यिकीय डेटा प्राप्त गर्न आवश्यक छ। यस तथ्यले व्याख्या गरिएको छ कि न्यूक्लिक एसिडको संरचनाले डिटर्जन्ट, विशेष गरी, अल्केलिससँग उपचार गरेर क्षति पुर्याउन सक्छ।

अनुसन्धान विधिहरु को वर्गीकरण

शोधका सबै आणविक जीवविज्ञान विधिहरू तीनवटा समूहमा विभाजित छन्:

1. प्रवर्धन (विभिन्न एन्जाइमहरू प्रयोग गरी)। यसमा पीसीआर-पोलिमिरेज चेन प्रतिक्रिया समावेश छ, जसले धेरै नैदानिक तरिकामा ठूलो भूमिका खेल्छ।

2. गैर-अपीलेशन। विधिहरु को यो समुह सीधा न्यूक्लिक एसिड को मिश्रण को काम संग सम्बन्धित छ। उदाहरणहरु 3 प्रकार को blotting, सूट हाइब्रिडाइजेसन, आदि।

3. एक जांच अणु देखि संकेत को पहिचान मा आधारित विधिहरु जुन एक विशिष्ट डीएनए वा आरएनए जांच मा बाँध्छ। एक उदाहरण एक हाइब्रिड कैप्चर सिस्टम (hc2) समाधान मा हाइब्रिडाइजेशन प्रणाली हो।

एंजाइमहरू कि आणविक जैविक विधिहरूमा प्रयोग गर्न सकिन्छ

आणविक निदान को धेरै तरिकाहरु एंजाइमहरु को एक विस्तृत श्रृंखला को उपयोग मा शामिल छ। तल सबै भन्दा सामान्य प्रयोग गरिन्छ:

1. Restrictase - "आवश्यक" डीएनए अणु आवश्यक भागहरूमा।

2. डीएनए बहुलक - deoxyribonucleic एसिड को डबल-फंसे वाला अणु synthesizes।

3. रिवर्स ट्रान्सक्रिप्टिस (रिवर्टेस) - आरएनए म्याट्रिक्समा डीएनए संश्लेषण गर्न प्रयोग गरियो।

4. डीएनए लेगेज - न्यूक्लेटोड्स को बीच फास्फोडीस्टर बांड को गठन को लागि जिम्मेदार।

5. Exonuclease - deoxyribonucleic एसिड को अणु को अन्त वर्गहरु बाट न्यूक्लेटोड्स हटाउँदछ।

पीसीए डीएन प्रवर्द्धन गर्ने मुख्य तरीका हो

पोलिमररेज चेन प्रतिक्रिया (पीसीआर) को सक्रिय आणविक जीवविज्ञान मा प्रयोग गरिन्छ। यो एक तरिका हो जसको एक विशाल संख्या एक डीएनए अणु (प्राप्त गर्न अणुहरु) बाट प्राप्त गर्न सकिन्छ।

PCR को मुख्य कार्यहरू निम्न हुन्:

- रोगहरूको निदान;

डीएनए को क्लोनिंग, जेन्स।

बहुलकरेज श्रृंखला प्रतिक्रिया निम्न तत्वहरु लाई आवश्यक छ: मूल डीएनए अणु, थर्मोस्टेबल डीएनए बहुलक (टाक या पीएफयू), डेक्साइबेरोन्यूक्लोटाइड फॉस्फेट (नाइट्रोजन आधारहरु को स्रोत), प्राइमर (डीएनए प्रति 2 प्राइमर) र बफर सिस्टम आफैं, जसमा यो लाग्न सक्छ सबै प्रतिक्रियाहरु।

पीसीआरले तीन चरणहरू समावेश गर्दछ: डेनरेटेशन, प्राइमर्स र लोभको एनीलिंग।

1. डेनरेसन 94- 9 0 डिग्री सेल्सियसको तापमानमा, दुई डीएनए को बीच हाइड्रोजन बांड को तोडने आय को छ, र परिणामस्वरूप हामी दुई एकल श्रृंखला अणुहरु प्राप्त गर्छन।

2. प्रेमीहरूको एनीलिंग। 50-60 डिग्री सेल्सियसको तापमानमा पूरक प्रकारको पूरै न्युक्लिक एसिड अणुहरूको अन्त्यमा पूरक प्रकारले संलग्न हुन्छन्।

3। 72 डिग्रीको तापमानमा, डिक्सोबेरोन्युक्लिक एसिडको बेटी डबल-स्ट्रन्ड गरिएको अणुहरूको संश्लेषण हुन्छ।

डीएनए अनुक्रम

आणविक जैविक विधिहरु अक्सर deoxyribonucleic एसिड को एक अणु में nucleotides के अनुक्रम के ज्ञान की आवश्यकता होती है। आनुवांशिक आनुवंशिक कोड निर्धारण गर्न प्रयोग गरिन्छ। भविष्यको आणविक निदान एक व्यक्तिको अनुक्रम निर्धारण गर्न प्राप्त मा आधारित हुनेछ।

निम्न प्रकारको क्रमबद्धता प्रतिष्ठित छन्:

• मैक्सम-गिल्बर्टद्वारा देखाउँदै;
• सागर द्वारा अनुक्रमित;
• Pyrosequencing;
• नैनोपोसिस अनुक्रमण।